Duchenne muscular dystrophy: RANK/RANKL/OPG (receptor activator of nuclear factor-kB/RANK ligand/osteoprotegerin) system and glucocorticoids / Distrofia muscular de Duchenne: el sistema RANK/RANKL/OPG (receptor activador del factor nuclear-kB/ligando de RANK/osteoprotegerina) y glucocorticoides

Abstract Duchenne muscular dystrophy (DMD) is an X-linked inherited disorder. Patients present with decreased bone mineral density (BMD) due to glucocorticoid therapy and progressive muscle weakness. Bone remodeling allows bone volume and structure to be maintained and controlled by local and systemic factors. These include the receptor activator of the nuclear factor-kB (RANK)/RANK ligand (RANKL)/osteoprotegerin (OPG) system, a determining pathway in the balance between bone formation and resorption. Disruptions in this complex, caused by factors such as glucocorticoids, can affect bone metabolism. The extensive action of the RANK/RANKL/OPG pathway suggests an influence on dystrophic muscle pathophysiology. This review aimed to highlight some aspects of the RANK/RANKL/OPG system, the effect of glucocorticoids on this pathway, and the pathophysiology of the patient with DMD.

Resumen La distrofia muscular de Duchenne (DMD) es un trastorno hereditario ligado al cromosoma X. Los pacientes presentan una disminución de la densidad mineral ósea (DMO) debido a los efectos adversos del tratamiento con glucocorticoides y a la debilidad muscular progresiva. El remodelado óseo permite mantener el volumen y la estructura ósea, proceso controlado por factores locales y sistémicos. Entre ellos destaca el sistema del receptor activador del factor nuclear-kB (RANK), su ligando natural RANKL (RANKL) y la osteoprotegerina (OPG), una vía determinante en el equilibrio entre la resorción y formación ósea. Las alteraciones en este complejo, originadas por factores como los glucocorticoides, pueden afectar el metabolismo óseo. La amplia acción de RANKL y OPG ha sugerido una influencia en la fisiopatología de la DMD. El objetivo de esta revisión fue destacar algunos aspectos del sistema RANK/RANKL/OPG, el efecto de los glucocorticoides en esta vía y la fisiopatología del paciente con DMD.

Avaliação do reparo ósseo na interface osso/implante em ratas com deficiência de estrógeno tratadas com OPG-Fc humano ou ranelato de estrôncio: análise histométrica, imunoistoquímica, biomecânica, por microtomografia computadorizada e microscopia confocal / Evaluation of bone repair at the bone/implant interface in estrogen deficient rats treated with human opg-fc or strontium ranelate. Histometric, immunohistochemistry, biomechanics, computerized microtomography and confocal microscopy analysis

Objetivo: Avaliar o reparo ósseo periimplantar em ratas submetidas à ovariectomia e tratadas com Ranelato de Estrôncio (625mg/kg/dia) ou OPG-Fc (10mg/Kg/2 vezes por semana). Material e Método: Sessenta e quatro ratas, com peso aproximado de 300 gramas, divididas em 4 grupos experimentais conforme tratamento medicamentoso e análises: SHAM; OVX; OVX/RE; OVX/OPG-Fc. Cada animal recebeu 2 implantes sendo 1 em cada metáfise tibial. A eutanásia foi realizada aos 42 e 60 dias após a instalação dos implantes. Foram realizadas as análises de microtomografia computadorizada (micro CT), biomecânica (torque reverso) histométrica, por microscopia confocal a laser, análise da expressão gênica por PCR em tempo real, histológica e imunoistoquímica. Os resultados histológicos evidenciaram para o grupo OVX-RE aspecto de neoformação óssea melhorada, com trabéculas mais espessas e baixa presença de tecido conjuntivo, comparado ao grupo OVX. Os resultados imunoistoquímicos demonstraram intensa marcação de OPG para o grupo OVX-RE e intensa marcação de RANKL para o grupo OVX. Já a análise por microscopia confocal evidenciou que o grupo OVX-RE obteve marcação superior para vermelho de alizarina comparado aos outros dois grupos (Tukey test ­ P < 0,05). Para os parâmetros BV/TV, Tb.Th, o grupo OVX/RE apresentou os maiores valores em relação aos demais grupos. Para Tb.Sp o grupo OVX/OPG-Fc apresentou o melhor resultado (OVX: p<0,05 e OVX/RE: p>0,05), e Tb.N, houve diferença estatisticamente significante na comparação dos resultados entre os grupos OVX e OVX/OPG-Fc (p<0,05). Para MAR e avaliação dos fluorocromos, OVX/RE mostrou melhor turnover ósseo periimplantar, para AON, o grupo SHAM apresentou os maiores resultados (OVX: p<0,05), e para ELCOI o grupo OVX/RE apresentou os melhores resultados. Concluiu-se que o tratamento com ranelato de estrôncio ou OPG-Fc humano melhora significativamente a reparação óssea periimplantar de ratas osteopênicas por inibição da atividade osteclástica exacerbada, promovendo um equilíbrio entre OPG/RANKL, apresentando essa característica melhorada nos animais tratados com ranelato de estrôncio(AU)

Objectives: Evaluate the peri-implant bone repair in rats submitted to ovariectomy and treated with Strontium Ranelate (625mg/kg/day) or OPG-Fc (10mg/kg/2 times per week). Material and Method: sixty-four rats weighing about 300 grams, they were divided into 4 experimental groups according with the treatment and analysis: SHAM; OVX; OVX/RE; OVX/OPG-Fc. Each animal received 2 implants, 1 in each tibial metaphysis. Euthanasia was performed 42 and 60 days after implant installation. Computed micro-tomography (micro-CT), biomechanical (reverse torque), histometrical, laser confocal microscopy, realtime gene expression (RT-PCR), histology and immunohistochemiscal analysis. The histological results revealed for the OVX-RE group a better bone neoformation with thicker trabeculae and low connective tissue compared to OVX group. The immunohistochemical results showed intense labeling of OPG to the OVX-RE group and intense labeling of RANKL to the OVX group. Confocal microscopy analysis exhibited that the OVX-RE group obtained a greater red alizarin marking compared to the others two groups (Tukey test - p<0.05). For the parameters BV/TV, Tb.Th, the OVX/RE group showed the larger values in relation to the other groups. For Tb.Sp the OVX/OPG-Fc group presented the best result (OVX: p<0.05 and OVX/RE: p> 0.05), and the Tb.N exhibited a statistical significant difference in the combination of results between the OVX and OVX / OPG-Fc groups (p<0.05). For the MAR and fluorochromes evaluation, OVX/RE group showed a better peri-implant bone turnover, for the AON, the SHAM group presented the higher results (OVX: p<0.05), and for the ELCOI, the OVX/RE group presented the best results. It is concluded that the treatment with strontium ranelate or OPG-Fc human improve significantly the peri-implant bone repair of osteopenic rats by inhibiting the exacerbated osteoclast activity, promoting a balance between the OPG/RANKL, it showing this improved characteristic in the animals treated with the strontium ranch(AU)

Polylactic/polyglycolic acid copolymer is a good carrier for bmp-2 on bone regeneration? / Copolímero do ácido polilático/poliglicólico é um bom carreador para bmp-2 na regeneração óssea?

The aim of this work was to evaluate the role of polylactic /polyglycolic acid copolymer as carrier for BMP-2 on bone regeneration in rat calvarium. Forty five adult male rats underwent 5-mm critical defects in bone calvaria to be divided into three groups according to the filling materials: Control-blood clot; PLGA-polylactic acid Polyglycolic/copolymer; PLGA + BMP-2 -polylactic acid Polyglycolic/copolymer associated with BMP-2. Sacrifice of animals occurred at 5, 15 and 30 days after surgery The evaluation of new bone formation was obtained by histomorphometry, while OPG and RANKL proteins were observed by immunohistochemistry. Statistical analysis was performed by means of nonparametric tests based on quantitative variables of independent samples. Considering the amount of newly formed bone, significant difference was detected between PGLA (178,2±137,5µm) and the other groups, at day 30. In PLGA + BMP-2 and control groups, the expression of RANKL was prevalent on the OPG in the periods of 15 and 30 days, suggesting a favorable condition for bone reabsorption in these periods. Therefore, immunoexpression of RANKL and OPG and bone formation observed in different groups and periods of analysis showed that the polylactic/polyglycolic acid copolymer does not act as a good carrier for BMP-2.

O objetivo deste estudo foi avaliar o copolímero do ácido polilático/poliglicólico como carreador para BMP-2 na regeneração óssea da calvária de ratos. Foram utilizados 45 ratos adultos machos. Defeitos ósseos críticos de 5mm de diâmetro foram realizados com uma broca trefina na calvária dos animais. Os animais foram divididos em três grupos, de acordo com o material de notas para preenchimento dos defeitos: Controle - coágulo; PLGA - copolímero ácido polilático/poliglicólico; PLGA + BMP-2 - copolímero do ácido polilático/poliglicólico associado a BMP-2. O sacrifício ocorreu aos 5, 15 e 30 dias após a cirurgia. A avaliação da neoformação óssea foi obtida por histomorfometria, enquanto a análise de marcação para as proteínas OPG e RANKL foi observada por imunohistoquímica. Análises estatísticas foram realizadas por meio de testes não paramétricos de variáveis quantitativas em amostras independentes. Com relação à quantidade de tecido ósseo neoformado, observou-se diferença estatística significante entre o grupo PLGA (178,2±137,5µm) e os demais, no período de 30 dias. Nos grupos PLGA+BMP-2 e Controle, a marcação de RANKL foi predominante sobre a marcação de OPG nos períodos de 15 e 30 dias, evidenciado uma condição favorável para a reabsorção óssea nestes períodos. Portanto, a marcação de RANKL e OPG, e a formação óssea observada nos diferentes grupos e tempos de análise mostrou que o copolímero de ácido polilático/poliglicólico não atua como um bom carreador para BMP-2.

Anquilose da articulação temporomandibular na infância: análise da expressão gênica da osteoprotegerina e do ligante do fator ativador do receptor nuclear kappa-b / Temporomandibular joint ankylosis in childhood: analysis of osteoprotein gene expression and kappa-b nuclear receptor activator factor ligand

A anquilose da articulação temporomandibular (AATM) apesar de rara, é uma doença grave e de difícil tratamento, que restringe os movimentos articulares acarretando ao paciente problemas estéticos, nutricionais, psicológicos e sociais. A formação do bloco ósseo anquilótico determina a gravidade da doença. O remodelamento ósseo é um mecanismo coordenado e extremamente complexo responsável pela formação e pela reabsorção óssea, sendo necessário no reparo de trauma ósseo e na manutenção da homeostasia do metabolismo mineral. Assim, entender o processo de remodelamento ósseo envolvido na fisiopatologia das AATMs pode trazer perspectivas no tratamento desta doença. O objetivo do estudo foi avaliar o perfil de expressão dos genes envolvidos no remodelamento ósseo, osteoprotegerina (OPG) e do fator ativador do receptor nuclear kappa-B/ligante (RANKL), em amostras de crianças com AATM para verificar se existe associação com a degeneração articular da ATM. Foram incluídos no estudo 11 crianças com diagnóstico de AATM e 5 amostras de osso controle (sem alteração patológica na ATM). A idade média dos pacientes com AATM foi de 12 anos, sendo que 9 (82%) já haviam realizado cirurgia prévia de AATM, 36% (n = 4) apresentaram otite em fase neonatal e 18% (n = 2) infecção prévia. A expressão de OPG e RANKL foi avaliada pela reação em cadeia da polimerase quantitativa. Foi observado uma menor expressão de OPG e RANKL nas amostras de pacientes com AATM (bloco anquilótico e osso adjacente à anquilose) comparado as amostras controle. O RANKL e OPG regulam a reabsorção óssea por estimulação do RANK em células precursoras de osteoclastos. Nossos resultados são corroborados por um estudo recente, justificando a investigação da via RANK-RANKL-OPG na AATM, com o intuito de se explorar novas possibilidades terapêuticas, que possam auxiliar no tratamento desta doença que ainda é negligenciada. A menor expressão de OPG e RANKL indicam que a patogênese da AATM em crianças está relacionada a diminuição da reabsorção óssea.

Temporomandibular joint ankylosis (TMJA), although rare, is a serious and difficult to treat disease, which restricts joint movements, causing aesthetic, nutritional, psychological and social problems to the patient. The formation of the ankylotic bone block determines the severity of the disease. Bone remodeling is a coordinated and extremely complex mechanism responsible for bone formation and resorption, and is necessary for the repair of bone trauma and the maintenance of homeostasis of mineral metabolism. Thus, understanding the process of bone remodeling involved in the pathophysiology of TMJA may bring perspectives in the treatment of this disease. The aim of the study was to evaluate the expression profile of the genes involved in bone remodeling, osteoprotegerin (OPG) and nuclear kappa-B receptor activator / RANKL (RANKL) in samples from children with TMJA to verify if there is association with Joint degeneration of TMJ. The study included 11 children with TMJA diagnosis and 5 control bone samples (without pathological alterations in TMJ). The mean age of patients with TMJA was 12 years, and 9 (82%) had previously performed TMJA surgery, 36% (n = 4) presented otitis in the neonatal phase and 18% (n = 2) had previous infection. The expression of OPG and RANKL was evaluated by the quantitative polymerase chain reaction. Lower expression of OPG and RANKL was observed in the samples of patients with TMJA (ankylotic block and bone adjacent to ankylosis) compared to the control samples. RANKL and OPG regulate bone resorption by stimulating RANK in osteoclast precursor cells. Our results are corroborated by a recent study, justifying the investigation of the RANK-RANKL-OPG pathway in the TMJA, in order to explore new therapeutic possibilities that may help in the treatment of this disease that is still neglected. Lower expression of OPG and RANKL indicate that pathogenesis of TMJA in children is related with lower bone resorption.

Elevated serum osteoprotegerin levels in women: friend or foe? / Níveis séricos elevados de osteoprotegerina na mulher: aliado ou inimigo?

SUMMARY Introduction: osteoprotegerin has emerged as a new candidate for the treatment of osteoporosis. However, high levels of osteoprotegerin have been linked to vascular calcification, an independent and well-defined risk factor for cardiovascular disease (CVD) and mortality. Thus, the action of osteoprotegerin in these situations has been questioned. Objective: to evaluate the effect of osteoprotegerin (OPG) on the human body, especially in bone tissue and in vascular diseases. Methods: the scientific databases consulted were PubMed-Medline and Cochrane, using keywords (MeSH terms) grouped into the following syntaxes: (Osteoprotegerin OR Osteoclastogenesis Inhibitory Factor OR Receptors, Tumor Necrosis Factor, Member 11b OR Tumor Necrosis Factor Receptor Superfamily, Member 11b OR FDCR-1 Protein OR FDCR 1 Protein OR OCIF Protein OR Follicular Dendritic Cell-Derived Receptor-1) AND (Bones AND Bone OR Bones AND Bone Tissue OR Bones OR Bone Tissue OR Cardiovascular Diseases). Results: Osteoprotegerin is present in various organs and binds to two ligands: nuclear factor kB (RANKL) related to the differentiation of osteoclasts, and tumor necrosis factor related to the apoptosis-inducing ligand (TRAIL). OPG inhibits the regulation effects of nuclear factor kB on inflammation and on the skeletal and vascular systems, preventing the apoptosis induced by TRAIL, being related to the preservation of bone tissue. Conclusion: a deeper knowledge of the mechanisms involved in the association between OPG serum levels, bone integrity and cardiovascular disease can provide important data for future therapeutic interventions.

RESUMO Introdução: a osteoprotegerina (OPG) tem surgido como uma nova candidata para o tratamento da osteoporose; no entanto, níveis elevados de OPG têm sido relacionados à calcificação vascular, um fator de risco independente e bem definido para doença cardiovascular (DCV) e mortalidade. Assim, a ação da OPG nessas situações tem sido questionada. Objetivo: avaliar a ação da OPG no corpo humano, em especial no tecido ósseo e nas doenças vasculares. Métodos: as bases de informação científica consultadas foram PubMed-Medline e Cochrane, utilizando-se palavras-chave (MeSH terms) agrupadas nas seguintes sintaxes: (Osteoprotegerin OR Osteoclastogenesis Inhibitory Factor OR Receptors, Tumor Necrosis Factor, Member 11b OR Tumor Necrosis Factor Receptor Superfamily, Member 11b OR FDCR-1 Protein OR FDCR 1 Protein OR OCIF Protein OR Follicular Dendritic Cell-Derived Receptor-1) AND (Bones AND Bone OR Bones AND Bone Tissue OR Bones OR Bone Tissue OR Cardiovascular Diseases). Resultados: a OPG está presente em vários órgãos e une-se a dois ligantes: o fator nuclear kB (RANKL), relacionado com a diferenciação dos osteoclastos, e o fator de necrose tumoral, relacionado ao ligante indutor de apoptose (TRAIL). Assim, a OPG inibe os efeitos da regulação do fator nuclear kB na inflamação e nos sistemas esquelético e vascular, prevenindo a apoptose induzida pelo TRAIL, estando relacionada com a preservação do tecido ósseo. Conclusão: um conhecimento mais aprofundado sobre os mecanismos envolvidos na associação entre os níveis séricos da OPG, integridade óssea e doenças cardiovasculares podem proporcionar dados importantes para futuras intervenções terapêuticas.

Experimental evidence of pharmacological management of anchorage in Orthodontics: A systematic review

Introduction: Orthodontic anchorage is one of the most challenging aspects of Orthodontics. Preventing undesired movement of teeth could result in safer and less complicated orthodontic treatment. Recently, several reviews have been published about the effects of different molecules on bone physiology and the clinical side effects in Orthodontics. However, the effects of local application of these substances on the rate of orthodontic tooth movement have not been assessed.Objectives: The aim of this research was to analyze the scientific evidence published in the literature about the effects of different molecules on orthodontic anchorage.Methods: The literature was systematically reviewed using PubMed/Medline, Scopus and Cochrane databases from 2000 up to July 31st, 2014. Articles were independently selected by two different researchers based on previously established inclusion and exclusion criteria, with a concordance Kappa index of 0.86. The methodological quality of the reviewed papers was performed.Results: Search strategy identified 270 articles. Twenty-five of them were selected after application of inclusion/exclusion criteria, and only 11 qualified for final analysis. Molecules involved in orthodontic anchorage were divided into three main groups: osteoprotegerin (OPG), bisphosphonates (BPs) and other molecules (OMs).Conclusions: Different drugs are able to alter the bone remodeling cycle, influencing osteoclast function and, therefore, tooth movement. Thus, they could be used in order to provide maximal anchorage while preventing undesired movements. OPG was found the most effective molecule in blocking the action of osteoclasts, thereby reducing undesired movements.

Introdução: a ancoragem ortodôntica é um dos aspectos mais desafiadores da Ortodontia. A prevenção de movimentos dentários indesejados poderia resultar em um tratamento ortodôntico mais seguro e menos complexo. Recentemente, foram publicadas várias revisões de literatura sobre os efeitos de diferentes substâncias na fisiologia do tecido ósseo e os efeitos colaterais clínicos na Ortodontia. Porém, os efeitos da aplicação local dessas substâncias no grau de movimentação dentária ortodôntica não foram avaliados.Objetivos: o objetivo da presente pesquisa foi analisar a evidência científica publicada na literatura sobre os efeitos de diferentes substâncias na ancoragem ortodôntica.Métodos: a literatura foi sistematicamente revisada utilizando-se as bases de dados PubMed/Medline, Scopus e Cochrane, de 2000 a 31 de julho de 2014. Os artigos foram selecionados, de maneira independente, por dois pesquisadores diferentes, tendo como base critérios de inclusão e exclusão previamente estabelecidos, com um índice Kappa de concordância de 0,86. A qualidade metodológica dos artigos revisados foi analisada.Resultados: a estratégia de pesquisa identificou 270 artigos; 25 artigos foram selecionados após a aplicação dos critérios de inclusão e exclusão, mas apenas 11 foram qualificados para a análise final. As substâncias envolvidas na ancoragem ortodôntica foram divididas em três grupos principais: osteoprotegerina (OPG), bisfosfonatos (BFs) e outras substâncias (OSs).Conclusões: diferentes substâncias são capazes de alterar o ciclo de remodelação óssea, influenciando na função dos osteoclastos e, portanto, na movimentação dentária. Sendo assim, essas substâncias podem ser utilizadas para promover o máximo de ancoragem e prevenir movimentos indesejados. A OPG foi a substância mais eficaz no bloqueio da ação dos osteoclastos, reduzindo os movimentos indesejados.

Vía de senalización en artritis reumatoide / Wnt signaling pathway in rheumatoid arthritis

La artritis reumatoide (AR) es una enfermedad inflamatoria sistémica crónica, caracterizadapor la formación de pannus, destrucción articular, deformidad, discapacidad y disminuciónde la calidad y de la expectativa de vida. La vía de senalización ˜ Wnt juega un papel importanteen un sinnúmero de procesos fisiológicos. Desde hace algunos anos ˜ ha sido implicadaen la regulación de células fundamentales para la homeostasis del hueso. Estudios recientessugieren que esta vía juega un rol en la patogénesis de la AR, mediante la sobreexpresión deinhibidores de esta vía como la proteína Dickkopf 1 (DKK1), la cual afecta de manera negativala diferenciación y la actividad de los osteoblastos. Niveles elevados de esta proteína sehan asociado a mayor progresión radiológica y a actividad de la enfermedad. Sin embargo,aún no está claro el papel de esta vía y del DKK1 en la AR. Más estudios al respecto podríanayudarnos a comprender las diferencias en la presentación clínica y en el pronóstico de estaenfermedad. Adicionalmente, podrían sugerir nuevos blancos terapéuticos...

Paciente con ataque cerebrovascular isquémicosecundario a arteritis de Takayasu: reporte de caso / Patient with stroke secondary to Takayasu arteritis case report

La arteritis de Takayasu es una vasculopatía crónica inflamatoria e idiopática de las grandesarterias, cuyas consecuencias son cambios oclusivos, estenóticos o aneurismáticos de laaorta y de sus ramas inmediatas.Se presenta el caso de una mujer de 37 anos ˜ con déficit neurológico focal y angiorresonancia,que demuestra disminución del flujo de la arteria carótida interna izquierda yadelgazamiento de la arteria cerebral izquierda con aortograma torácico y de vasos de cuelloque confirma los hallazgos y, además, demuestra estenosis de la arteria subclavia izquierda,cumpliendo los criterios clasificatorios de una arteritis de Takayasu.Se realiza una revisión de la arteritis de Takayasu, haciendo énfasis en la fisiopatología,manifestaciones clínicas, diagnóstico, tratamiento y pronóstico...

Polimorfismos genéticos e o insucessodos implantes dentários: estudo piloto / Genetic polymorphism and failure ofdental implants: a pilot study

Objetivo: verificar a relação entre polimorfismos genéticos ligados às citocinas da remodelação óssea osteoprotegerina (OPG) e o ligante do ativador do receptor do fator nuclear kappa ß(RANKL), além de relacionar a presença de polimorfismos em OPG e RANKL com o insucesso clínico dos implantes dentários ao longo do tempo e determinar quais combinações de polimorfismos de OPG e RANKL estão associados ao insucesso de implantes dentários. Métodos: vinte pacientes, de ambos os sexos, maiores de 18 anos, reabilitados com 34 implantes dentários, foram avaliados por um período de 24 meses após a instalação das coroas sobre implantes. Após os exames clínico e radiográfico, os pacientes foram incluídos no grupo de insucesso dos implantes caso um ou mais do seguintes critérios fossem encontrados: mobilidade, queixas subjetivas persistentes, infecção peri-implantar recorrente com supuração, radiolucência contínua ao redor do implan- te, profundidade de sondagem ≥ 5mm e sangramento à sondagem. Foi coletado sangue periférico para a análise do polimorfismo das citocinas OPG e RANKL por meio da reação em cadeia da polimerase (PCR). Resultados: não houve diferença estatisticamente significativa entre o grupo de falha dos implantes em relação aos genótipos de OPG e RANKL. Conclusão: os polimorfismos de OPG e RANKL não influenciaram no insucesso dos implantes dentários na amostra avaliada.

Objective: To investigate the relationship between genetic polymorphisms related to cytokinesin bone remodeling osteoprotegerin (OPG) and receptor activator of nuclear factor kappa ß ligand (RANKL). It also aims to relate the presence of OPG and RANKL polymorphisms with clinicalfailure of dental implants over time and to determine which combinations of OPG and RANKL polymorphisms are associated with failure of dental implants. Methods: Twenty patients of both sexes, over eighteen years, rehabilitated with thirty-four dental implants were evaluated during 24months after implant-supported crown placement. After clinical and radiographic examination, patients were included in a failure group if one or more of the following criteria were identified: mobility, persistent subjective complaints, recurrent peri-implantitis with suppuration, continuous radiolucency around the implant, probing depth ≥ 5 mm and bleeding on probing. Peripheral blood was collected for analysis of cytokine OPG and RANKL polymorphisms by polymerase chain reaction (PCR). Results: There were no statistically significant differences between the failure group in relation to genotypes OPG and RANKL. Conclusion: OPG and RANKL polymorphisms didnot influence dental implants failure in the investigated sample.

Análise imunoistoquímica após terapia fotodinâmica com cloro-alumínio ftalocianina em tecidos gengivais de humanos / Immunohistochemical analyzes after photodynamic therapy with chloro-aluminum phthalocyanine in human gingival tissues

Embora a terapia fotodinâmica venha sendo utilizada como uma ferramenta útil nos últimos 30 anos em oncologia, poucos estudos clínicos em odontologia têm sido conduzidos. A terapia fotodinâmica (TFD) utiliza fotossensibilizantes atóxicos e seletivos que são administrados nas células alvo seguida de aplicação local de luz visível, produzindo espécies reativas de oxigênio capazes de ocasionar morte celular por apoptose ou necrose, de afetar a vascularidade local, além de exercer importantes efeitos no sistema imune. Novas gerações de fármacos fotossensibilizantes, como as ftalocianinas nanoparticuladas tem apresentado excelentes resultados na atividade antitumoral e antibacteriana. Neste contexto, o presente trabalho realizou o primeiro protocolo clínico de aplicação local da nanoemulsão de cloroalumínio ftalocianina (AlClFc) seguida de irradiação em gengiva de humanos, e analisou descritiva e comparativamente, por meio de imunoistoquímica, a expressão de RANK, RANKL, OPG e VEGF em um modelo split-mouth. Oito voluntários saudáveis com indicação clínica de exodontia foram incluídos no estudo. Sete dias antes da exodontia, foi aplicado na gengiva dos participantes, 5µM de nanoemulsão de AlClFc seguida de irradiação com laser diodo (660nm, 7J/cm2), o lado contralateral foi utilizado como controle. Os espécimes teciduais foram removidos sete dias após a TFD e subdivididos em dois grupos (grupo teste e grupo controle) para análise histológica e imunoistoquímica. Os pacientes foram monitorados no dia aplicação, 7, 14 e 30 dias após a terapia para avaliação de efeitos adversos da terapia. Alterações vasculares foram observadas nas amostras gengivais que receberam a TFD. Áreas de edema e congestão vascular, além de intensa vascularização foram visualizadas. Adicionalmente, focos de calcificação distrófica em região subepitelial foram visualizados nos espécimes do grupo teste. Os resultados demonstraram um padrão similar dos escores de imunomarcação de RANK, RANKL e VEGF entre os grupos teste e controle, não havendo diferença estatística significante (p=0.317, p=0.777, p=0.814, respectivamente). RANK e RANKL exibiram imunomarcação fraca ou ausente na maioria dos espécimes analisados. Não houve imunomarcação para a OPG. O VEGF mostrou imunomarcação moderada a forte nos espécimes do grupo teste. Adicionalmente, o estudo clínico mostrou que a terapia foi bem tolerada por todos os pacientes. Os efeitos adversos foram de curta duração e totalmente reversíveis. Tomados em conjunto, os resultados apresentados neste estudo mostraram que o protocolo utilizado por nós, mediado por nanoemulsão contendo AlClFc, é seguro para aplicação clínica em tecido gengival e, sugerem uma forte imunomarcação para o VEGF após a terapia. (AU)

Although photodynamic therapy have been used as a useful tool over the past 30 years in oncology, few clinical trials have been conducted in dentistry. Photodynamic therapy (PDT) uses non-toxic photosensitizers and selective which are administered in target cells followed by local application of visible light, producing reactive oxygen species capable of causing cell death by apoptosis or necrosis, injured the local vasculature, and exert important effects on the immune system. New generations of photosensitizing agents, such as nanoparticulate phthalocyanines, has shown excellent results in antitumor and antibacterial activity . In this context, the present work constitutes the first clinical protocol of local application of nanoemulsion chloro-aluminum phthalocyanine (AlClFc) followed by irradiation in human gingiva, and analyzed descriptively and comparatively , by means of immunohistochemistry , the expression of RANK , RANKL , OPG and VEGF in a split -mouth model. Eight healthy volunteers with clinical indication for extraction were included in the study . Seven days before the extraction, was injected in the gingiva of participants, 5µM of nanoemulsion AlClFc followed by irradiation with diode laser (660nm, 7J/cm2 ), the contralateral side was used as control. Tissue specimens were removed seven days after the TFD is performed. Tissues sample were divided into two groups (test and control groups) for histological and immunohistochemical analysis. Patients were monitored at days, 0, 7, 14 and 30 to assess adverse effects of the therapy. Vascular alterations were seen in gingival samples that received PDT. Areas of edema and vascular congestion, and intense vascularization were viewed . Additionally, dystrophic calcification in subepithelial region were observed in the test group. The results showed a similar pattern of immunostaining scores of RANK, RANKL and VEGF between the test and control groups, with no statistically significant difference (p = 0.317, p = 0.777, p = 0.814, respectively). RANK and RANKL exhibited weak or absent immunostaining in most specimens analyzed. There was no immunostaining for OPG. VEGF showed moderate to strong immunostaining in specimens from the test group. In addition, the clinical study showed that therapy was well tolerated by all patients. Adverse effects were short-time and completely reversible. Taken together, the results presented in this study showed that PDT mediated by nanoemulsion containing AlClPc is safe for clinical application in gingival tissue and suggests that a strong immunostaining for VEGF after therapy. (AU)

Localización de OPG en la pulpa dental del Ratón Albino Suizo / OPG Location in dental pulp of Albino Swiss Mice

En condiciones fisiológicas, el órgano dentinopulpar no se encuentra asociado a procesos de remodelación y resorción. La Osteoprotegerina (OPG) es una molécula del Factor de Necrosis Tumoral (TNF) que participa en la diferenciación y activación de osteoclastos, por lo que su papel en el control del proceso de reabsorción radicular interna debe ser determinado. Se tomaron secciones histológicas de 5 µm tomadas de primeros molares de 8 hemimandíbulas de ratón y fueron sometidas a proceso de inmunohistoquímica con la técnica de complejo avidina-biotina peroxidasa para la detección de OPG. Se identificó la presencia de OPG en las regiones central y periférica de la pulpa de ratones de 4 y 12 semanas. La pulpa de ratones albino suizo mostró presencia diferencial de OPG en las zonas central y periférica

Under physiological conditions, the dentinopulpar complex is not associated with remodeling and resorption. Osteoprotegerin (OPG) is a TNF molecule associated with osteoclast activation and differentiation. Therefore, OPG role in internal root resorption must be determined. We obtained histological sections of 5 µm in first molars from 8 hemimandibles of mice, which were subjected to the avidin-biotin peroxidase complex immunohistochemical procedure for detection of OPG. Differential OPG presence was identified in central and peripheral pulp in dental pulp of 4 and 12 week-old mice

Analysis of the polymorphism of osteoprotegerin by polymerase chain reaction in patients with type 2 diabetes and the association with periodontal condition / Análise de polimorfismos da região promotora T/C950 da osteoprotegerina através da reação em cadeia de polimerase em pacientes diabéticos tipo 2 e com periodontite

Objective: The aim of this paper was to analyze the presence of polymorphism in the promoter region T/C950 of the osteoprotegerin gene and its distribution in diabetic patients with periodontitis, when compared to the control group. Methods: 67 patients took part in the research. The test group (n = 32) was composed of diabetic patients with periodontitis and the control group (n = 35) included patients without diabetes and without periodontitis. For the diagnosis of periodontitis, the following clinical parameters were evaluated: probing depth, bleeding on probing and clinical attachment level. The DNA to investigate the polymorphisms of osteoprotegerin, obtained through the technique of polymerase chain reaction, was obtained from the blood serum of the participants.Results: Polymorphisms of osteoprotegerin were found in promoter region -950T/C but there was no significance (p=1.000). Only the control group showed significant results for the probing depth according to the polymorphic region. Conclusion: No influence was found between genetic polymorphisms of osteoprotegerin in patients with diabetes and periodontitis.

Objetivo: Analisar a presença de polimorfismos na região promotora T/C950 do gene da osteoprotegerina, e a sua distribuição em pacientes diabéticos e com periodontite, quando comparados ao grupo controle saudável. Métodos: A pesquisa contou com a participação de 67 indivíduos distribuídos em um grupo teste (n=32), constituído por pacientes diabéticos e com periodontite, e um grupo controle (n=35) que incluía pacientes não diabéticos e sem periodontite. Para o diagnóstico da periodontite, foram avaliados os parâmetros clínicos: profundidade de sondagem, sangramento à sondagem e nível de inserção clínica. O DNA para a investigação dos polimorfismos da osteoprotegerina, através da técnica da reação em cadeia de polimerase convencional, foi obtido a partir de amostras sanguíneas dos participantes. Resultados: Polimorfismos no gene da osteoprotegerina foram encontrados na posição -950T/C da região promotora, porém sem significância estatística (p=1,000). Apenas o grupo controle apresentou resultados significativos para a profundidade de sondagem segundo a região polimórfica (p=0,017).Conclusão: Não foi observada influência entre o polimorfismo da região T/C950 do gene da osteoprotegerina em pacientes com periodontite e a diabetes mellitus.

Análise histomorfométrica e imunoistoquímica do processo de reparo alveolar de ratas ovariectomizadas com dieta pobre em cálcio e submetidas à terapia com raloxifeno ou com alendronato / Histomorphometric and immunohistochemistry analysis of the alveolar healing process of ovariectomized rats with a low calcium diet submitted to raloxifene or alendronate therapy

Objetivos: Avaliar a influência do alendronato e raloxifeno no processo de reparo alveolar em ratas com osteoporose induzida (ovariectomizadas e submetidas a uma dieta pobre em cálcio). Materiais e Métodos: Sessenta e quatro ratas foram divididas em quatro grupos (n = 16) de acordo com o tratamento em ratas sham com dieta normal, ratas ovariectomizadas com uma dieta pobre em cálcio sem tratamento medicamentoso, ratas ovariectomizadas com uma dieta pobre em cálcio tratadas com alendronato e ratas ovariectomizadas com uma dieta pobre em cálcio tratadas com raloxifeno. Assim, a análise histomorfométrica foi realizada, bem como expressão da proteína TRAP, osteocalcina, osteoprotegerina (OPG) e RANKL, pela técnica de imunoistoquímica. Para comparar os valores médios obtidos nos diferentes grupos e períodos experimentais, os dados foram analisados pelos testes de Kruskal-Wallis e Nemenyi-Damico-Wolfe-Dunn como post-hoc técnicas (α =. 05). Resultados: No longo prazo, os grupos SHAM e raloxifeno mostraram a melhor taxa de formação óssea (P <0,05). A pior taxa de formação óssea foi observado no grupo OVX ST. Os grupos raloxifeno e alendronato melhoram a taxa de formação óssea, quando administrados em animais com osteoporose. O grupo raloxifeno apresentou uma melhor resposta no longo prazo. O grupo alendronato mostrou uma resposta favorável em 14 dias comparado ao grupo raloxifeno, mas uma resposta reduzida aos 42 dias pós-extração. A imunoistoquímica revelou a expressão da proteína TRAP, osteocalcina, osteoprotegerina (OPG) e fator de RANKL. Foi possível notar um osso maduro no grupo SHAM aos 14 dias, um osso imaturo no grupo OVX ST e uma qualidade óssea intermediária nos grupos OVX ALE e OVX RAL. Conclusões: A ovariectomia associada a uma dieta pobre em cálcio atrasou o processo de reparo alveolar. O tratamento com alendronato e raloxifeno melhorou o reparo alveolar em ratas osteoporóticas, mas não o suficiente para atingir os valores histométricos e de expressão das...

Objectives: To evaluate the influence of alendronate and raloxifene in the alveolar healing process of rats with induced osteoporosis (ovariectomized and low calcium diet). Materials and Methods: The sixty-four rats were divided into four groups (n = 16) according to the treatment in ovariectomized rats with a low calcium diet treated with alendronate, ovariectomized rats with a low calcium diet raloxifene-treated, ovariectomized rats with a low calcium diet without pharmacological treatment and sham rats with a balanced diet. Thus, histomorphometric analysis was performed, as well as expression of TRAP protein, osteocalcin, osteoprotegerin (OPG) and RANKL, by the immunohistochemistry technique. To compare the mean values obtained in different groups and experimental periods, the data were analyzed by Kruskal-Wallis, Nemenyi-Damico-Wolfe-Dunn tests were further used as post-hoc techniques (α=.05). Results: In the long term, the SHAM and raloxifene groups showed the best bone formation rate (P <.05). The worst bone formation rate was observed in the untreated OVX group. Raloxifene and Alendronate groups improved bone formation rate when administered in osteoporotic animals. Raloxifene group had a better response in the long term. Alendronate group showed a favorable response at 14 days compared to Raloxifene group, but a reduced response at 42 days post-extraction. Immunohistochemistry revealed the expression of TRAP protein, osteocalcin, osteoprotegerin (OPG) and RANKL, it was possible to note a mature bone at 14 days in the SHAM group balanced diet, and an immature bone in OVX group low calcium diet and an intermediate quality in the Alendronate and Raloxifene groups. Conclusion: Ovariectomy delays the alveolar wound healing process and interferes with the bone turnover. The ALE replacement and the RLX treatment improved the healing but not enough to reach histomorphometric and immunocolocalization values of the sham group

Análise histomorfométrica e imunoistoquímica do processo de reparo alveolar de ratas ovariectomizadas com dieta pobre em cálcio e submetidas à terapia com raloxifeno ou com alendronato / Histomorphometric and immunohistochemistry analysis of the alveolar healing process of ovariectomized rats with a low calcium diet submitted to raloxifene or alendronate therapy

Objetivos: Avaliar a influência do alendronato e raloxifeno no processo de reparo alveolar em ratas com osteoporose induzida (ovariectomizadas e submetidas a uma dieta pobre em cálcio). Materiais e Métodos: Sessenta e quatro ratas foram divididas em quatro grupos (n = 16) de acordo com o tratamento em ratas sham com dieta normal, ratas ovariectomizadas com uma dieta pobre em cálcio sem tratamento medicamentoso, ratas ovariectomizadas com uma dieta pobre em cálcio tratadas com alendronato e ratas ovariectomizadas com uma dieta pobre em cálcio tratadas com raloxifeno. Assim, a análise histomorfométrica foi realizada, bem como expressão da proteína TRAP, osteocalcina, osteoprotegerina (OPG) e RANKL, pela técnica de imunoistoquímica. Para comparar os valores médios obtidos nos diferentes grupos e períodos experimentais, os dados foram analisados pelos testes de Kruskal-Wallis e Nemenyi-Damico-Wolfe-Dunn como post-hoc técnicas (α =. 05). Resultados: No longo prazo, os grupos SHAM e raloxifeno mostraram a melhor taxa de formação óssea (P <0,05). A pior taxa de formação óssea foi observado no grupo OVX ST. Os grupos raloxifeno e alendronato melhoram a taxa de formação óssea, quando administrados em animais com osteoporose. O grupo raloxifeno apresentou uma melhor resposta no longo prazo. O grupo alendronato mostrou uma resposta favorável em 14 dias comparado ao grupo raloxifeno, mas uma resposta reduzida aos 42 dias pós-extração. A imunoistoquímica revelou a expressão da proteína TRAP, osteocalcina, osteoprotegerina (OPG) e fator de RANKL. Foi possível notar um osso maduro no grupo SHAM aos 14 dias, um osso imaturo no grupo OVX ST e uma qualidade óssea intermediária nos grupos OVX ALE e OVX RAL. Conclusões: A ovariectomia associada a uma dieta pobre em cálcio atrasou o processo de reparo alveolar. O tratamento com alendronato e raloxifeno melhorou o reparo alveolar em ratas osteoporóticas, mas não o suficiente para atingir os valores histométricos e de expressão...

Objectives: To evaluate the influence of alendronate and raloxifene in the alveolar healing process of rats with induced osteoporosis (ovariectomized and low calcium diet). Materials and Methods: The sixty-four rats were divided into four groups (n = 16) according to the treatment in ovariectomized rats with a low calcium diet treated with alendronate, ovariectomized rats with a low calcium diet raloxifene-treated, ovariectomized rats with a low calcium diet without pharmacological treatment and sham rats with a balanced diet. Thus, histomorphometric analysis was performed, as well as expression of TRAP protein, osteocalcin, osteoprotegerin (OPG) and RANKL, by the immunohistochemistry technique. To compare the mean values obtained in different groups and experimental periods, the data were analyzed by Kruskal-Wallis, Nemenyi-Damico-Wolfe-Dunn tests were further used as post-hoc techniques (α=.05). Results: In the long term, the SHAM and raloxifene groups showed the best bone formation rate (P <.05). The worst bone formation rate was observed in the untreated OVX group. Raloxifene and Alendronate groups improved bone formation rate when administered in osteoporotic animals. Raloxifene group had a better response in the long term. Alendronate group showed a favorable response at 14 days compared to Raloxifene group, but a reduced response at 42 days post-extraction. Immunohistochemistry revealed the expression of TRAP protein, osteocalcin, osteoprotegerin (OPG) and RANKL, it was possible to note a mature bone at 14 days in the SHAM group balanced diet, and an immature bone in OVX group low calcium diet and an intermediate quality in the Alendronate and Raloxifene groups. Conclusion: Ovariectomy delays the alveolar wound healing process and interferes with the bone turnover. The ALE replacement and the RLX treatment improved the healing but not enough to reach histomorphometric and immunocolocalization values of the sham group.

Estudo da imunoexpressão de rankl e opg, do índice angiogênico (CD34) e da presença de miofibroblastos (SMA) em ceratocistos odontogênicos isolados e associados à síndrome de gorlin / Study of rankl and opg immunoreactivity of the angiogenic index (CD34) and the presence of myofibroblasts (SMA) and isolated in odontogenic keratocysts associated with gorlin syndrome

Os ceratopistos odontogênicos se destacam em relação a outras lesões císticasodontogênicas pelo comportamento clínico potencialmente agressivo e por se apresentarem! associados, em alguns casos, à síndrome de Gorlin. Estudos têm sugerido que os ceratocistossindrômicos, em comparação às lesões isoladas, possuem maior capacidade de crescimento einfiltração e maior tendência à recorrência. O objetivo do presente trabalho consistiu emanalisar, por meio de imuno-histoquímica, as expressões do ligante do receptor ativador dofetor nuclear KB (RANKL) e da osteoprotegerina (OPG), o índice angiogênico (CD34) e apresença de miofibroblastos (a-SMA), em ceratocistos isolados primários e recorrentes eceratocistos associados à síndrome de Gorlin. A amostra foi composta por 30 ceratocistosisolados (22 primários e 8 recorrentes) e 22 ceratocistos sindrômicos. A expressão de RANKLe OPG foi avaliada no epitélio e na cápsula fibrosa das lesões, estabelecendo-se o percentualde células imunopositivas, de acordo com os escores: 0 (< 10% das células positivas), 1 (11%- 50% das células positivas), 2 (51% - 75% das células positivas) e 3 (> 76% das célulaspositivas). Além disso, os casos foram categorizados, segundo a proporção RANKL/ OPG,em: RANKL > OPG, RANKL < OPG e RANKL = OPG. O índice angiogênico foi analisadopor meio da contagem dos microvasos imunomarcados pelo anticorpo anti-CD34, em 5campos (200x). Para a avaliação dos miofibroblastos, foram quantificadas as célulasimunorreativas ao anticorpo anti-a-SMA, em 10 campos (400x). A análise das expressões deRANKL e OPG, no revestimento epitelial e na cápsula fibrosa, não revelou diferençassignificativas entre os grupos (p > 0,05). Em relação à proporção RANKL/ OPG norevestimento epitelial, grande parte das lesões isoladas primárias (54,5%) e sindrômicas(59,1%) exibiu proporção RANKL < OPG e proporção RANKL = OPG, respectivamente (p >0,05)...